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Para caracterização das interações e da estabilidade de biomoléculas
A calorimetria baseia-se no facto de que todas as reações químicas envolvem trocas de energia. Na microcalorimetria são medidos pequenos fluxos de calor em pequenos volumes de amostra, tornando a técnica adequada para biomateriais.
A microcalorimetria é usada para estudar reações que envolvem biomoléculas, incluindo interacções entre moléculas e mudanças conformacionais como folding de proteínas. Esses processos geralmente são estudados usando duas técnicas calorimétricas: Calorimetria de Titulação Isotérmica (ITC) e Calorimetria Diferencial de Varrimento (DSC).
A calorimetria por titulação isotérmica (ITC) mede várias características de uma interação de ligação, inclusive a afinidade (KD), a estequiometria (n), a entalpia da reação de ligação (∆H) e a entropia (∆S) numa única experiência. A técnica é rápida, não requer identificação fluorescente e pode ser utilizada com proteínas sem atividade catalítica. As experiências de ITC geralmente envolvem a titulação do componente de teste em relação à proteína alvo a uma temperatura constante, com o instrumento de microcalorimetria ITC medindo o calor liberado ou absorvido durante o evento de ligação.
A ITC é usada para:
- Quantificar a afinidade de ligação.
- Optimização e seleção de candidatos.
- A caracterização de proteínas para aplicações bioterapêuticas.
- Medição termodinâmica e concentração activa.
- Caracterização do mecanismo de acção.
- Confirmação dos alvos de ligação pretendidos na descoberta de pequenas moléculas.
- Determinação da estequiometria e especificidade de ligação.
- Validação de valores IC50 e EC50 durante hit-to-lead.
- Medição da cinética da enzima.
- Para análise de proteínas e outras biomoléculas.
A Calorimetria Diferencial de Varrimento (DSC) é uma técnica de análise térmica usada para o estudo da estabilidade de proteínas e outras biomoléculas. Tem uma ampla aplicação na engenharia de proteínas, desenho de fármacos e produção biofarmacêutica, onde o desenvolvimento de proteínas estáveis é uma meta crítica.
A DSC é uma técnica de análise térmica que mede as transferências de energia que ocorrem na biomolécula num programa controlado de temperatura, tornando possível estudar materiais no seu estado nativo.
A DSC permite:
- A caracterização e a seleção de proteínas mais estáveis para aplicações bioterapêuticas.
- Estudos de interacção de ligantes.
- Optimização rápida da purificação e das condições de produção.
- Determinação fácil e rápida de condições ideais para formulações líquidas.
- Ensaio rápido de indicação de estabilidade para proteínas-alvo a serem usadas em screening.
